手工固相多肽合成所需试剂和耗材(的内容如下)
一、器材
反应管、多胎合成振荡器、多孔加热器、真空泵、洗瓶(六个)、微型试管
二、检测试剂
a.茚三酮、KCN、苯酚
b.乙醛、对四氯苯醌(C6O2Cl4)
三、缩合
a.HBTU、NMM(N-甲基吗啡啉)
b.HOBt、DIC
四、洗、溶剂
DMF、DCM、甲醇、乙醇
五、脱保护
哌啶(20%)/DMF
六、裂解剂
TFA、EDT、TIS、苯甲硫醚
七、结第一个氨基酸残基
乙酸酐、吡啶、DMAP
八、 树脂和保护氨基酸
进口wang树脂和保护氨基酸
手工固相多肽合成操作步骤(的内容如下)
一.树脂溶涨
将树脂放入反应管中,加DMF(15ml/g),30min.
二.脱保护
去掉DMF,加20%哌啶DMF溶液(15ml/g),5min,去掉再加20%哌啶DMF溶液(15ml/g),15min.
三.检测
抽掉哌啶溶液,取十几粒树脂,用乙醇洗三次,加入茚三酮,KC N,苯酚溶液各一滴,105℃-110℃加热5min
四.洗
DMF(10ml/g)两次,甲醇(10ml/g)两次,DMF(10ml/g)两次
五.缩合
方法a:保护氨基酸三倍过量,HBTU三倍过量,均用尽量少DMF溶解,加入反应管,立刻假如NMM十倍过量.反应30min.
方法b:保护氨基酸三倍过量,HOBt三倍过量,均用尽量少DMF溶解,加入反应管,立刻假如DIC三倍过量.反应30min.
六.洗
DMF(10ml/g)一次,甲醇(10ml/g)两次,DMF(10ml/g)两次
七. 重复二至六操作
八.最后一次洗涤
DMF(10ml/g)两次,甲醇(10ml/g)两次,DMF(10ml/g)两次, DCM(10ml/g)两次
九.裂解
配制裂解液(10ml/g) TFA 94.5%;水2.5%;EDT 2.5%;TIS 1%
120min (注:g是树脂的单位级)
十.吹干洗涤
将裂解液用氮气尽量吹干,用乙醚洗六次,然后常温挥干.