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A法:在弱酸的条件下氧化
1.用醋酸水溶解多肽,比例应需要而定
2.稀释到多肽浓度为0.5-1.6mg/ml,最终醋酸的浓度为5%
3.用碳酸氨调节PH值到6
4.加DMSO(10-20%体积)在25℃,反应2-3天,(HPLC或Ellman test监测)
5.稀释最终溶液到TFA为0.05%,乙腈为5%
6.上反相柱除掉DMSO和其他杂质
B法:在碱性条件下氧化
1.溶解多肽在0.01M磷酸盐反冲液中,PH值7.5,获得最终多肽浓度是大约1mg/ml
2.加DMSO(1%体积),在25℃下反应
3.HPLC或Ellman test监测,1-2天完成,冻干
DMSO酸性氧化法合成二硫键
具体操作步骤
1.称取somatostatin(生长抑素)纯品11mg
2.加7.6 ml水完全溶解
3.加AcoH 0.4ml,使AcoH的浓度为5%。
4.加入碳酸氨15mg,使PH值调节到6
5.加入DMSO 1ml,把溶液放在摇床上开始反应,反应时间为24小时左右。
6.加入3.5ul的TFA,和250ul的乙腈
7.反向柱纯化